1.卡氏棘阿米巴（Acanthamoeba castellanii）
物种名：卡氏棘阿米巴
拉丁学名：Acanthamoeba castellanii
分类学地位：动物界Animal；肉足鞭毛门Sarcomastiugophora；
肉足纲Lobosasida；阿米巴目Amoebida；阿米巴科Amoebidae；
棘阿米巴属Acanthamoeba
卡氏棘阿米巴（Acanthamoeba castellanii）是一种非常特殊的生物，属于原生动物门、阿米巴目、棘阿米巴属。这种生物在淡水和土壤中广泛分布，并且可以感染人体，引起一种严重的脑膜脑炎疾病。
1.1生物学特性
1.1.1培养特征
在琼脂培养基上，棘阿米巴滋养体呈类椭圆形,运动迟缓,胞质内可见特征性的搏动泡，其周围可见虫体移动过的痕迹.接种后第5日起可观察到包囊，包囊呈圆球形,双层囊壁，内层呈星状或多角形。PYG培养液中滋养体运动不活跃，呈不规则形，有数个细棘状伪足。紧贴培养瓶的壁生长，内、外质间界限不清，内质呈颗粒状，内含收缩泡及食物泡，核呈类圆形，核仁位于中央，核仁与核膜间有空隙；包囊形态呈类圆形或圆球形，具有双层的囊壁,外囊壁呈皱缩状，内囊壁呈四边形或波浪状[1]。
1.1.2形态学特征
在透射电镜下，卡氏棘阿米巴细胞膜完整，双层核膜清晰可见，大而圆的核仁位于中央，染色质分布均匀；胞质内线粒体丰富聚集，嵴清晰，呈板状紧密排列；胞质中有大小不一的圆形或椭圆形空泡[2]。
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图1 卡氏棘阿米巴在透射电镜下照片
A-卡氏棘阿米巴的细胞结构[2] B-卡氏棘阿米巴滋养体形态[1] C-卡氏棘阿米巴包囊体形态[1]
1.1.3生化特征
卡氏棘阿米巴是一种厌氧生物，它们通过糖酵解获得能量。在缺氧条件下，它们能够利用葡萄糖产生乙醇和二氧化碳。此外，它们也能利用多种有机物作为碳源和能源。在病变组织内可查见包囊，但不易检查到滋养体。包囊对外界环境的抵抗力极强，对一般抗菌药物、氯化物、化学消毒剂等均不敏感。包囊甚至在自然环境下可以生存数年。
1.1.4 分子生物学特征
（1）毒力因子
卡氏棘阿米巴的某些蛋白质和基因对其致病性有重要作用。这些毒力因子主要包括粘附素、溶血素等，它们有助于卡氏棘阿米巴粘附和侵入宿主细胞，并对其造成损伤。
（2）溶血素基因序列
卡氏棘阿米巴的溶血素基因序列是其毒力因子之一，对致病性有重要影响。通过对这些基因序列的研究，可以深入了解卡氏棘阿米巴的致病机制，为防治提供新的思路。
1.2分布、传播与致病性
1.2.1 分布与传播
卡式棘阿米巴呈世界性分布，通常存在在土壤和尘埃，新鲜水源如湖水、河水和温泉中、矿物盐水和海水中。也可以存在于泳池、热盆浴、直饮水(如管壁的淤积层中和龙头中)，甚至加热、通风、空凋和加湿等设备中。
1.2.2 致病性
卡式棘阿米巴入侵途径尚不完全清楚，已知可从皮肤伤口、穿透性角膜外伤、损伤的眼结膜或经呼吸道、生殖道等进入人体。多数寄生于脑、眼、皮肤等部位。棘阿米巴在自然界分布广泛，正常人一般不被感染，但眼部或皮肤受损时可被感染[1]。棘阿米巴性角膜炎虽在感染性角膜炎中占不足1%，但可引起顽固性角膜溃疡、葡萄膜炎、虹膜炎、巩膜、睫状体和玻璃体的炎症而导致失明，是严重的致盲性疾病。
卡式棘阿米巴角膜炎的症状与其他许多普通眼部感染症状相似。症状会持续数周至数月，各人所表现出的症状不尽相同，其主要表现如下：眼痛、眼红肿、视力模糊、对光敏感、眼睛有异物感、多泪 。眼睛感染棘阿米巴的患者不会觉察到感染在体内的扩散。
卡式棘阿米巴可以引发严重的，甚至是致死性的脑部感染和被称为“肉芽肿阿米巴脑炎”的脊索感染。一旦发生了此感染，患者会出现头痛、颈部僵硬、反胃呕吐、疲惫、思维混乱、对周围的人和环境缺乏反应、失去平衡感及对身体的控制、癫痫和出现幻觉等症状。病程超过数周，患者通常会死亡。
图2卡式棘阿米巴角膜炎患者眼界前照片[3]
1.3检测方法
（1）角膜刮片镜检-湿片法镜检：取角膜刮片涂于载玻片上，加1滴生理盐水或10%KOH溶液，加盖玻片压薄后在普通光学显微镜下观察[4],镜下可观察到棘阿米巴的四个不同阶段。
（2）角膜刮片镜检-染色镜检：利用染色技术可使棘阿米巴包囊或滋养体易于识别，染色可分为湿式染色和干式染色。湿式染色将约25 μL角膜刮片(棘阿米巴)悬浮液铺在载玻片上均匀涂开，然后加入1滴染色剂，加上盖玻片直接镜检。干式染色是将约50 μL角膜刮片(棘阿米巴)悬液滴在载玻片上均匀涂开，用无水甲醇固定再染色镜检。常规染色方法有吉姆萨染色、伊红染色、碘染色等，其中，革兰染色不适合棘阿米巴原虫[5]。
（3）角膜组织培养：角膜刮片刮取溃疡浅表边缘组织，当棘阿米巴原虫数量较少时，镜检方法不易检出，为了提高检出率，应进行角膜组织培养。角膜组织培养出棘阿米巴原虫是确诊棘阿米巴原虫感染的“金标准”[5]。
（4）病理组织检查：角膜活检被誉为“微生物进行性角膜炎的最终调查”,但对于角膜严重溃疡者，棘阿米巴原虫已侵入基质层，角膜刮片难以保证准确的阳性率而导致漏诊[6]。行眼球摘除术或角膜移植术时，可将手术切除的角膜材料进行病理检查。将切碎的角膜材料进行HE染色或改良三色蓝染色法[5]。
（5）分子生物学检测：目前常用PCR法及高通量测序技术进行检测[5]。PCR具有灵敏度高、特异度高、标本需要量少、检测速度快等优点，但也具有一定的局限性。由于高灵敏度容易发生交叉污染，且不能区分临床样本中的活棘阿米巴和死棘阿米巴，因此难以确定角膜感染是否仍然存在，仅可用于鉴定棘阿米巴存在与否及其基因型。高通量测序技术灵敏度和特异性分别为88%和100%,并且还可对棘阿米巴原虫进行基因分型。但目前，该技术受标本量、标本处理、核酸提取、文库制备及测序深度的影响，结果的准确性和特异度有待临床进一步验证，基于 该技术诊断卡式棘阿米巴的报道仍有限[7]。
（6）免疫学检测：目前可用于检测的技术有ELISA法[8]、多克隆抗体法[9-11]、一种基于免疫层析的荧光二氧化硅纳米颗粒检测试剂盒[12]，但基于商品化抗体的卡式棘阿米巴诊断仍不可用。
（7）共聚焦显微镜活体检测：共聚焦显微镜是一种非侵入性成像技术，可在数分钟内获得角膜各层的图像，直接显示角膜内的病原体[13]。在检查前，将适量的表面麻醉剂滴入患者眼部下结膜穹窿进行麻醉，由眼科医生或技术员在角膜病灶中心和周围溃疡边缘进行多面扫描[14]。目前，推荐体内共聚焦显微镜和体外病原学联合检测快速诊断AK[5]。
图3 培养后经各种染色的卡式棘阿米巴形态[15]
A-苏木素染色的滋养体 B-中性红染色的滋养体 C-吉姆氏染色的包裹 D-H.E染色的滋养体
图4 氢氧化钾湿片检获 (×200)[8]
a.包囊 b.滋养体
图5 兔卡式棘阿米巴角膜炎模型血清抗体滴度变化[8]
1.4典型案例
2007年2月，英国女子克莱尔像平时一样戴上隐形眼镜去上班。刚到公司不久，她的左眼就不断会感到疼痛。之后几天，她的眼睛变得异常敏感，一点光线也会让她痛得睁不开眼，最后前往医院做角膜检查，结果发现，她的左眼正是感染这种叫棘阿米巴原虫的寄生虫。两个星期之后，她的角膜开始充血水肿、溃疡，最终只好选择眼角膜移植，但手术并不成功。肆虐的棘阿米巴原虫几乎吞噬了克莱尔的眼睛，还使她患上了神经痛。痛不欲生之下，她决定接受脑部手术，切断脸部神经麻痹自己的痛苦。但在手术中克莱尔又中风了，彻底瘫痪，直到1年多的治疗才下床。可即便左眼失明，中风瘫痪，但棘阿米巴原虫依旧顽强地繁衍着，将克莱尔折磨得生不如死。
1.5防治对策
（1）规范保存、佩戴、消毒隐形眼镜。
（2）加强个人卫生、饮用水处理和环境改善。
（3）饮用水处理方面，应对水源进行严格监测和处理，确保饮用水安全。
（4）避免佩戴隐形眼镜游泳、热水盆浴或淋浴，导致感染风险增加。
（5）避免接触受污染的水源。
（6）环境改善方面，应加强环境卫生管理，减少环境污染和垃圾堆积，以降低卡氏棘阿米巴的传播风险。
参考文献
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