副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）
物种名：副溶血性弧菌
拉丁学名：Vibrio parahaemolyticus
分类学地位：细菌界Bacteria；假单胞菌门Pseudomonadota；
γ-变形菌纲Gammaproteobacteria；弧菌目Vibrionales；
弧菌科Vibrionaceae；弧菌属Vibrio
副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种具有嗜盐性的细菌，常存在于近海海水、海底沉积物、海产品及盐渍食品中，是夏、秋季沿海地区食物中毒和急性腹泻的主要病原菌。世界第一例有记录的副溶血性弧菌食物中毒发生在日本，1950年日本大阪发生一起食用青鱼干引起的暴发性食物中毒事件。
1.1生物学特性
1.1.1培养特征
副溶血性弧菌在营养琼脂平板中加入适量NaCl即可生长，生长所需最适NaCl浓度为3.5%，在无盐培养基中不能生长。最适pH为7.7-8.0，但pH为9.5时仍能生长。在TCBS琼脂平板上35℃培养18-24小时，呈直径为2-3 mm的绿色菌落（图1）[1]。
图1 副溶血性弧菌在TCBS琼脂平板上的生长情况[2]
1.1.2形态学特征
副溶血性弧菌革兰氏染色阴性，需氧或兼性厌氧，形态多为杆菌或稍弯曲弧菌。无荚膜，无芽胞，运动活泼。在液体培养时在菌体的一端会形成单鞭毛，在固体培养时可在菌体周围形成多数侧生鞭毛[1]。
A：革兰氏染色照片[3]，B：三维成像照片[4]
1.1.3生化特征
吲哚、赖氨酸脱羧酶、氧化酶、鸟氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验均阳性；能发酵葡萄糖、麦芽糖，不发酵乳糖、蔗糖；在不含NaCl和含100 g/L NaCl的蛋白胨水中不生长，在含30 g/L和70 g/L NaCl的蛋白胨水中生长；典型生化反应为神奈川现象，即在特定条件下，副溶血性弧菌中某些菌株在含高盐（7% NaCl）的人O型血（或兔血）及以D-甘露醇为碳源的血琼脂平板上可产生β溶血现象，表示该菌株能产生耐热性溶血毒（TDH）[1]。
1.2分布、传播与致病性
1.2.1分布与传播
该菌存在于近海的海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品及盐渍食品中。是夏、秋季沿海地区食物中毒和急性腹泻的主要病原菌，由该菌引起的食物中毒经烹饪不当的海产品或盐腌制品所传播[5]。该菌的感染率每年都会在春季和夏季增加，因为此时水温升高，更有利于病原体在河口环境中生存。
1.2.2致病性
感染副溶血性弧菌会导致腹痛、腹泻、呕吐和低热，粪便多为水样，少数为血水样，该病的病程短（2-3天），有自限性，恢复较快，病后免疫力不强，可重复感染，严重时可引起败血症。开放性伤口若暴露于含有副溶血性弧菌的温热海水中，也可引起中度至重度的皮肤感染。
副溶血性弧菌有三种抗原，即O抗原（菌体抗原）、K抗原（荚膜抗原）及H抗原（鞭毛抗原）。其中O抗原为耐热性抗原，经100℃加热后仍保留抗原性。目前已记载12种O抗原和超过70种K抗原[6]，公认有76种血清型。H抗原为所有菌株共有，无分型意义[7]。
副溶血性弧菌的致病因子有3种，分别是不耐热溶血毒素（Thermolabile hemolysin， TLH）、耐热性溶血毒素（Thermostable direct hemolysin， TDH）和耐热相关溶血素（Thermostable related hemolysin， TRH）。
（1）TLH：由tlh基因编码，tlh基因对副溶血性弧菌的鉴定具有重要意义，是副溶血性弧菌的种特异性基因，环境分离株和患者分离株都携带该基因[8]。
（2）TDH：由tdh基因编码，这是一种肠毒素，由2个亚单位组成，被认为是副溶血性弧菌最重要的致病因子。其溶血机制可能是与动物红细胞膜表面的神经节苷脂受体结合而导致溶血。能耐受100℃ 10分钟而不被破坏，具有细胞毒性、心脏毒性和肠毒性。TDH对人和兔红细胞的溶血性较高，其溶血能力与致病性呈平行关系，KP+菌株感染后12小时内可出现食物中毒的典型症状[9]。
（3）TRH：由trh基因编码，生物学功能与TDH相似，测序发现trh与tdh基因有70%的序列相似性。
1.3检测方法
- 传统方法：按要求处理样品，确保样品的代表性和均一性，去除干扰物质。样品制备后接种至3%氯化钠碱性蛋白胨水进行增菌培养，取增菌液划线接种至TCBS选择培养基上培养，挑取典型可疑菌落（绿色或蓝绿色）进行革兰染色，观察结果，并进一步通过嗜盐性等生化试验及血清学凝集试验完成鉴定[10]。
- 免疫学检测方法：通过免疫SPF母鸡并从蛋黄中提取纯化获得针对副溶血性弧菌的特异性鸡蛋黄抗体IgY，随后合成金纳米颗粒AuNPs并通过静电自组装将IgY抗体固定于AuNPs表面，形成IgY-AuNPs复合物作为捕获探针。检测系统包含水溶性CdSe/ZnS量子点、游离AuNPs和IgY-AuNPs复合物，在无目标菌时量子点与AuNPs接触发生电荷转移导致荧光淬灭。当存在副溶血性弧菌时，IgY-AuNPs与细菌表面抗原特异性结合并发生聚集，使AuNPs远离量子点，荧光恢复。通过测量631 nm处的荧光强度即可实现检测[11]。
- 分子生物学检测方法：以副溶血性弧菌种特异性基因tlh、主要毒力基因tdh和毒力调控基因toxR为靶标，采用如表1所示的特异性茎环探针。所有探针的5’端均标记FAM荧光报告基团，并在序列内部特定位置的脱氧胸腺嘧啶上连接TAMRA荧光淬灭基团。在63℃的等温扩增反应中，茎环探针与靶序列结合并在Bst DNA聚合酶的作用下延伸，形成可被FEN1酶特异性识别和切割的瓣状结构。切割导致FAM荧光基团与TAMRA淬灭基团分离，从而产生可检测的荧光信号。该方法经验证与其他常见食源性病原体无交叉反应，具有灵敏度高、特异性强和重复性佳的特点，是可在单一微流控芯片上实现四样本、三靶标同步高通量检测致病性副溶血性弧菌的有效手段[12]。
注：序列中的/iTAMdT/表示该处为一个内部氨基修饰的dT碱基，其上连接有TAMRA淬灭基团
1.4典型案例
2021年敖华英[13]等报道，某医院收治24名出现腹泻、伴腹痛、呕吐症状的旅行团人员，对病例样本及食品、环境进行常见食物中毒致病菌的实验室检测，结果在凉拌海蜇中检出副溶血性弧菌，这是导致食物中毒的原因。
1.5防治对策
副溶血性弧菌存活能力强，在抹布和砧板上能生存1个月以上，使用前应注意消毒。若已经出现副溶血性弧菌导致的食物中毒现象，治疗可选用抗生素，如庆大霉素、诺氟沙星等。
参考文献
[1] 周庭银. 临床微生物学诊断与图解. 上海: 上海科学技术出版社, 2007.
[2] Public Health Image Library (PHIL). https://phil.cdc.gov/Details.aspx?pid=16675.
[3] MicrobeWiki. https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Vibrio_parahaemolyticus_Infection.
[4] Public Health Image Library (PHIL). https://phil.cdc.gov/Details.aspx?pid=21921.
[5] McLaughlin JB, DePaola A, Bopp CA et al. Outbreak of Vibrio parahaemolyticus gastroenteritis associated with Alaskan oysters. The New England Journal of Medicine, 2005, 353: 1463-1470.
[6] Hugh R, Feeley JC. Report (1966-1970) of the subcommittee on taxonomy of vibrios to the International Committee on Nomenclature of Bacteria. International Journal of Systematic Bacteriology, 1972, 22: 123.
[7] 陈媛媛, 王亚男, 刘士朋. 副溶血性弧菌致病性和检测方法研究进展. 河北医药, 2022, 44: 3491-3495.
[8] Bej AK, Patterson DP, Brasher CW et al. Detection of total and hemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in shellfish using multiplex PCR amplification of tlh, tdh and trh. Journal of Microbiological Methods, 1999, 36: 215-225.
[9] Martinez-Urtaza J, Lozano-Leon A, DePaola A et al. Characterization of pathogenic Vibrio parahaemolyticus isolates from clinical sources in Spain and comparison with Asian and North American pandemic isolates. Journal of Clinical Microbiology, 2004, 42: 4672-4678.
[10] GB 38488-2021.
[11] Liu Y, Zhao C, Fu K et al. Selective turn-on fluorescence detection of Vibrio parahaemolyticus in food based on charge-transfer between CdSe/ZnS quantum dots and gold nanoparticles. Food Control, 2017, 80: 380-387.
[12] Lang Z, Lin S, Li J et al. A microfluidic based stem-loop probes mediated isothermal amplification for multiplex detection of Vibrio parahaemolyticus. Food Chemistry, 2025, 492: 145571.
[13] 敖华英, 黄震辉, 陈怡静 等. 一起由副溶血性弧菌引起两个旅行团食物中毒的调查. 实用预防医学, 2021, 28: 1133-1136.