龟分枝杆菌（Mycobacterium chelonae）
物种名：龟分枝杆菌
拉丁学名：Mycobacterium chelonae
分类学地位： 细菌界Bacteria；分枝杆菌门Actinobacteria；
放线菌纲Actinobacteria；分枝杆菌目Actinomycetales；
分枝杆菌科Mycobacteriaceae；分枝杆菌属Mycobacterium
龟分枝杆菌（Mycobacterium chelonae）属于非结核分枝杆菌中的快速生长分枝杆菌，临床常见的致病性快速生长分枝杆菌还包括脓肿分枝杆菌和偶发分枝杆菌等。近年来由快速生长分枝杆菌引起的感染日益增多，是医院内感染的重要致病菌，甚至可导致医院感染暴发事件连续发生。快速生长分枝杆菌引起的临床症状广泛，且治疗难度大、费用高。供水系统污染是快速生长分枝杆菌感染的重要来源，需注意供水系统的消毒、隔离和无菌技术操作，以预防和控制医院感染的发生[1]。
1.1生物学特性
1.1.1培养特征
龟分枝杆菌属于快速生长分枝杆菌，与结核分枝杆菌等缓慢生长菌不同。该菌在固体培养基上可形成灰白色菌落，菌落大小不均、稍显干燥、不溶血。因其生长速度较快，实验室在怀疑快速生长分枝杆菌时，应结合菌落形态、抗酸染色和后续分子鉴定进行综合判断[2]。
图1 龟分枝杆菌在各种平板上的培养结果
A：沙堡琼脂培养培养基[3]，B：血平板[4]
1.1.2形态学特征
龟分枝杆菌属于快速生长分枝杆菌，在固体培养基上表现为大小不均、稍显干燥、不溶血的灰白色菌落。生理盐水涂片呈油脂状。革兰染色为受色浅淡且着色不均的阳性杆菌，抗酸染色强阳性且呈明显分枝状。快速生长分枝杆菌为分枝或不规则杆菌，大小为（0.3-0.6）μm × （0.7-4.0）μm，革兰染色不易着色，抗酸染色为红色，在25-45℃生长[1, 2]。
图2 龟分枝杆菌培养显微镜照片[3]
1.1.3生化特征
龟分枝杆菌的生化鉴定中，芳香硫酸酯酶试验呈阳性，硝酸盐还原试验和铁吸收试验均为阴性。这些生化反应特征有助于将龟分枝杆菌与部分其他快速生长分枝杆菌相鉴别[5]。
1.2分布、传播与致病性
1.2.1分布与传播
龟分枝杆菌在土壤、灰尘和水中广泛分布。院外感染多由于开放伤口受水或土壤污染所致，医院供水及饮水系统可能是院内感染的主要感染来源。医院供水系统污染医疗器械，当手术、植入体、注射、透析、导管留置等侵入性操作时，易导致医源性感染。尚未证实快速生长分枝杆菌可引起人与人之间的传播。水的污染状况与临床感染关系最为密切，调查自来水及淋浴水发现，65%水样中可分离到快速生长分枝杆菌，公共场所水样中分离出的龟分枝杆菌与临床检测菌株具有同源性。我国快速生长分枝杆菌感染的流行病学特点为南方高于北方，沿海地区高于内地，气温温和地区高于寒冷地区[1]。
1.2.2致病性
龟分枝杆菌常引起皮肤软组织感染，临床表现从无症状到红斑、皮下结节、蜂窝组织炎、溃疡、窦道等各有不同。医院内皮肤或软组织感染甚至暴发，常常发生在外伤、手术、医疗美容、注射、针灸后。RGM引起的皮肤播散型感染，皮肤可见结节、皮下脓肿、脓疱、溃疡或混合存在以上改变，常由脓肿分枝杆菌、龟分枝杆菌引起，常发生于骨髓恶性肿瘤和实体器官移植患者。该菌引起的临床症状广泛，且治疗难度大、费用高，是医院内感染的重要致病菌。RGM具有低毒性，其致病多依赖宿主屏障受损、局部操作和污染暴露，而非以典型呼吸道传播为主[1]。
1.3检测方法
（1）传统检测方法：龟分枝杆菌传统检测以体外培养结合生化反应为主：将血液、脓液、组织等标本集菌处理后，接种于血琼脂、麦康凯琼脂或 Middlebrook固体培养基，该菌营养要求低，在30-35℃需氧培养2-7天、37℃培养25天均可形成无色圆形、光滑或粗糙的突起菌落；培养物涂片染色可见革兰阳性杆菌、抗酸染色阳性。生化鉴定方面，菌株可在 TCH、PNB培养基正常生长，耐受5 μg/mL NAP，符合快速生长分枝杆菌特征；其芳香硫酸酯酶试验3天、14天结果均为阳性，硝酸盐还原试验、铁吸收试验均为阴性，多数菌株可在麦康凯琼脂生长，所有菌株均无法在45℃环境生长，依据上述特征可与其他快速生长分枝杆菌区分。
（2）分子生物学方法：定量荧光PCR（qPCR）方法：针对龟分枝杆菌rpoB基因的保守特异性区域，采用基于SYBR Green I染料法的实时荧光定量PCR体系，使用引物，配置20μL 反应体系（含2 × SYBR Green PCR Master Mix 10 μL，上下游引物各0.4 μm，DNA模板2 μL，无核酸酶水补足至 20 μL）后在荧光定量PCR仪上扩增。反应程序为：95℃预变性5 min；随后40个循环（95℃变性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，此阶段采集荧光信号），反应结束后进行熔解曲线分析，龟分枝杆菌特异性产物通常在80℃-85℃之间形成单一特征性熔解峰。该方法可排除引物二聚体干扰，最低检测限可达数十个拷贝，适合微量病原体的早期快速诊断与致病载量分析[6, 7]，该方法所用靶标及引物（探针）序列见表1。
表1 龟分枝杆菌实时荧光定量PCR引物与探针序列[6, 7]
| 基因 | 名称 | 序列（5′→3′） | |
| rpoB | 上游引物 | TCAAGGAGAAGCGCTACGA | |
| 下游引物 | GGATGTTGATCAGGGTCTGC | ||
1.4典型案例
2025年，美国一家四级儿科医院在启用获得LEED认证、强调节水的危重症大楼后，龟分枝杆菌呼吸道培养阳性率增加。调查对楼内供水终端进行环境培养，25台制冰/饮水机中10台检出该菌，阳性率40%，是主要环境来源；低流量供水设计、用水停滞及周边施工被认为共同增加了水系统定植风险。医院据此强化制冰/饮水机停用与消毒、水系统冲洗及持续环境监测[8]。
1.5防治对策
龟分枝杆菌对克拉霉素、阿米卡星等药物较敏感，临床治疗需根据药敏试验结果选择敏感药物，并采用联合用药方案。快速生长分枝杆菌引起的临床症状广泛，且治疗难度大、费用高。医院供水系统污染是快速生长分枝杆菌院内感染的主要来源之一，应重视供水系统的消毒、隔离和无菌技术操作。此外，建议尽量避免使用液体化学消毒剂对手术器械等医疗用品进行浸泡灭菌，规范使用医疗用水、无菌液体，严格执行无菌技术操作规程和手卫生规范，多方面综合管理以减少感染的发生[1]。
参考文献
[1] 杨亚敏, 杨晶, 高立芳 等. 快速生长分枝杆菌感染研究进展. 中华医院感染学杂志, 2019, 29: 956-962.
[2] 邹晓艳, 杨德远, 杨玲 等. 从脓肿液及病变组织中检出龟分枝杆菌. 微生物与感染, 2013, 8: 96-97.
[3] 张忠奎, 康道现, 刘太华 等. 皮肤龟分枝杆菌感染的分子生物学鉴定. 中国人兽共患病学报, 2014, 30: 227-230.
[4] 柳青, 邱广斌, 翟如波. 血培养分离出龟分枝杆菌的分析. 检验医学, 2014, 11: 1592-1593.
[5] 熊礼宽, 杨应周, 庄玉辉. 龟分枝杆菌感染的实验室诊断. 中华检验医学杂志, 2000, 23: 183.
[6] Adékambi T, Colson P, Drancourt M. rpoB-based identification of nonpigmented and late-pigmenting rapidly growing mycobacteria. Journal of Clinical Microbiology, 2003, 41: 5699-5708.
[7] Kim HJ, Lee SH, Kim O et al. Differentiation of mycobacterial species by hsp65 duplex polymerase chain reaction. Journal of Clinical Microbiology, 2006, 44: 3004-3008
[8] Baker A. Mycobacterium chelonae outbreak investigation at a quaternary pediatric hospital following the opening of a LEED-certified critical care tower: where does water sustainability intersect with infection control? University of Texas Health Science Center at Houston, 2025. https://digitalcommons.library.tmc.edu/uthgsbs_docs/6179/