泰国肝吸虫（Opisthorchis viverrini）
物种名：泰国肝吸虫
拉丁学名：Opisthorchis viverrini
分类学地位：真核生物界Eukaryota；扁形动物门Platyhelminthes；
吸虫纲Trematoda；后睾目Opisthorchiida；
后睾科Opisthorchiidae；后睾吸虫属Opisthorchis
泰国肝吸虫（Opisthorchis viverrini）是东南亚流行的寄生虫，主要分布于泰国、老挝、柬埔寨等湄公河沿岸区域，生食或未煮熟鱼类是主要传播途径。虫体寄生于人体胆管，可诱发胆管炎、胆石症、胆管周围纤维化，甚至胆管癌。粪便镜检为诊断金标准，吡喹酮是主要治疗药物。
1.1生物学特性
1.1.1生活史
泰国肝吸虫成虫寄生于哺乳动物宿主的胆管和胰管内，附着于黏膜上，产下发育完全的虫卵，虫卵随粪便排出体外。虫卵被适宜的螺类（第一中间宿主）吞食后，孵出毛蚴，毛蚴在螺体内依次经历胞蚴、雷蚴、尾蚴等发育阶段。尾蚴自螺体内逸出，侵入淡水鱼（第二中间宿主），在鱼肉组织内或鱼鳞下方形成囊蚴。猫、犬以及包括人类在内的各类食鱼哺乳动物作为终宿主，因摄入含有囊蚴的未煮熟鱼类而发生感染。囊蚴被吞食后，在十二指肠内脱囊，经肝胰壶腹上行进入胆管，附着于胆管壁并发育为成虫，感染3至4周后成虫即可产卵。成虫寄生于哺乳动物宿主的胆管与胰管中，完成生活史循环[1]。
图1 泰国肝吸虫生活史[2]
1.1.2形态学特征
泰国肝吸虫是一种小型扁形寄生虫，成虫体长5-10 mm，宽1-2 mm，虫体透明，呈薄而尖的柳叶状，具有腹吸盘和口吸盘，借此附着于胆管黏膜。该吸虫为雌雄同体，具有分叶状的睾丸和卵巢，产出虫卵随宿主粪便排出体外（图2A）。虫卵呈椭圆形，长约30 μm，宽约12 μm（图2B）。囊蚴呈球形，包囊壁薄而透明，包囊大小约为（105.3-152.6）μm×（152.6-184.2）μm。囊内幼体在排泄囊内可见深色颗粒，体部散在棕色色素，其口吸盘和腹吸盘大小相等[3]（图2C）。泰国肝吸虫尾蚴整体呈烟斗状，虫体带有一对眼点，尾部细长，尾的两侧生有鳍状褶皱[4]（图2D）。
图2 泰国肝吸虫形态结构
A：成虫[1]，B：虫卵[1]，C：囊蚴[5]，D：尾蚴[4]
1.1.3生化特征
70℃、80℃加热10分钟可完全杀灭泰国肝吸虫虫卵，50℃处理杀虫效果差[6]；泰国肝吸虫尾蚴的寿命受水温和盐度的显著影响。尾蚴存在22℃至30℃的耐温区间，在此范围内存活较佳；当水温升高至38℃时，尾蚴存活时间显著缩短[7]；虫卵灭活方面，70℃或80℃加热10分钟以上可100%杀灭虫卵[8]；在发酵鱼制品中，囊蚴在发酵第1至4天仍具活力，发酵超过4天则囊蚴退化，而将鱼在4℃冷藏3天后发酵可有效灭活囊蚴，防止感染[9]。
1.2分布、传播与致病性
1.2.1分布与传播
泰国肝吸虫流行于泰国、老挝、越南、柬埔寨等东南亚国家，泰国北部、东北部感染率最高。该虫为食源性寄生虫，感染者粪便排出虫卵，先后经螺、淡水鲤科鱼完成发育，当地人食用生腌淡水鱼易感染，食肉野生动物作为保虫宿主持续维持传播循环[10]。
1.2.2致病性
泰国肝吸虫的致病性集中体现为长期寄生诱发的一系列肝胆病变，该寄生虫被列为一类致癌物，具备明确胆管癌诱发能力。
虫体囊蚴在十二指肠脱囊后上行定居于胆管，成虫依靠口、腹吸盘持续吸附、活动，对胆管上皮造成持续性机械损伤；同时成虫释放排泄-分泌产物与虫体抗原，激活宿主Toll样受体，大量诱导白介素-6、白介素-8等促炎因子分泌。长期物理刺激与化学毒素共同作用，使胆管上皮增殖、脱落、腺瘤样增生，逐步发展为胆管周围纤维化；纤维化持续加重会造成胆管狭窄梗阻、胆汁淤积，临床可诱发胆管炎、胆囊炎、胆石症与复发性化脓性胆管炎等良性肝胆疾病。
该寄生虫最严重的危害为诱发胆管癌（CCA），也是东南亚疫区高死亡的核心诱因，癌变由多重机制协同驱动：一是成虫长期机械刺激与代谢产物直接损伤胆管上皮；二是虫体分泌Ov-GRN-1颗粒蛋白、硫氧还蛋白等物质，促细胞增殖并抑制凋亡；三是慢性炎症释放一氧化氮、活性氧，造成胆管细胞氧化、硝化DNA损伤；四是疫区发酵食品外源亚硝胺叠加感染诱导的内源性亚硝胺，双重提升基因突变风险；五是虫体分泌组织蛋白酶F、B1降解细胞外基质，破坏基底膜，促进肿瘤侵袭转移。因此泰国肝吸虫相关胆管癌进展快、易转移、恶性程度高，患者整体预后极差[11]。
1.3检测方法
- 传统方法：基于粪便标本镜检原理开展泰国肝吸虫虫卵检测，常用加藤厚涂片法、福尔马林-乙酸乙酯沉淀浓集法。加藤厚涂片法操作简便，但虫卵富集效果有限；福尔马林-乙酸乙酯沉淀浓集法通过离心富集样本内虫卵，检出效果更优。为提升虫卵检出率，涂片镜检前可优先采用甲醛-乙酸乙酯沉淀法预处理粪便样本。两类方法均依靠显微镜识别虫卵形态，适用于疫区人群流行病学大规模调查[12]。
- 分子生物学方法：根据Pumpa等人[13]的研究，为改善泰国肝吸虫轻症感染的PCR检测效果，针对核糖体内部转录间隔区2（ITS-2）、线粒体细胞色素c氧化酶亚基1（cox1）和细胞色素b（cyb）三个基因设计了新的特异性引物（表1），建立了常规PCR方法。结果显示，ITS-2、cox1和cyb引物的总体灵敏度分别为76.9%、96.2%和100%；在虫卵数低于50个/克（EPG）的轻感染样本中，三者灵敏度分别为66.7%、94.1%和100%。所有引物均未与粪类圆线虫、带绦虫、鞭虫、蛔虫、菲律宾毛细线虫及钩虫等常见寄生虫DNA发生交叉反应。
| 目的基因 | 引物名称 | 引物序列（5′→3′） |
| ITS-2 | OvITS2-F | AACAATTGAGCCACGACTCC |
| OvITS2-R | CATCGACATCTTGAACGCATA | |
| cox1 | OvCOX1-F | TTGCCAGGATTCGGTATGAT |
| OvCOX1-R | CCGCAAGCATATACAACCAA | |
| cyb | OvCYB-F | TTGCTGATGTAGGCAAGAGG |
| OvCYB-R | GGTTGCCGCTCAATAAGACA |
1.4典型案例
2008至2011年间，在泰国东北部9个府的穆河、芝河和颂堪河流域以及老挝万象省和沙湾拿吉省的南俄河与色邦亨河域的48个湿地（包括稻田、水库、池塘、溪流等）中，对5790只（泰国）和5848只（老挝）作为麝猫后睾吸虫（Opisthorchis viverrini）第一中间宿主的Bithynia siamensis goniomphalos螺类进行了调查，检出方法为将螺单只置于容器中经12小时黑暗+12小时光照诱导尾蚴逸出后镜检计数，部分尾蚴经人工感染鱼类获得囊蚴再感染仓鼠获得成虫以确认虫种。检测结果显示，泰国4个采样点检出阳性螺，阳性率为0.22-6.93%，其中颂堪河流域两个稻田样点阳性率分别高达6.93%和3.45%，显著高于既往报道；老挝9个采样点检出阳性螺，阳性率为0.37-8.37%，其中南俄河流域两个稻田样点阳性率分别高达8.37%和4.44%。研究还发现大螺（长度>10 mm或宽度>6 mm）的阳性率显著高于中螺，且每日逸出尾蚴数量与螺壳大小呈显著正相关。高阳性率表明人类及动物（猫、狗）保虫宿主向环境排出虫卵的传播持续存在且可能加剧，泰国和老挝湄公河地区需加强中间宿主监测和综合防控措施[14]。
1.5防治对策
临床首选吡喹酮驱虫，三氯苯达唑可作为替代药物；胆管癌需按分型开展手术、放化疗等对症治疗。公共防控以泰国Lawa综合模型为典范，依托校园与社区科普，宣传禁食生鱼，同步常态化监测螺、鱼两类中间宿主。卫生层面完善粪污处理，切断环境传播链条[11]。
参考文献
[1] Centers for Disease Control and Prevention (CDC). https://www.cdc.gov/dpdx/opisthorchiasis/index.html.
[2] Public Health Image Library (PHIL). https://wwwn.cdc.gov/phil/Details.aspx?pid=3414.
[3] Sanpool O, Aung W P P, Rodpai R et al. Human liver fluke Opisthorchis viverrini (Trematoda, Opisthorchiidae) in Central Myanmar: New records of adults and metacercariae identified by morphology and molecular analysis. Acta Tropica, 2018, 185: 149-155.
[4] Senasri N, Tesana S, Yuangsoi B et al. Effects of vitamin C supplementation on infectivity of Opisthorchis viverrini metacercaria in silver barb (Barbonymus gonionotus). Bioscience Research, 2019, 16: 2204-2216.
[5] Prasongwatana J, Laummaunwai P, Boonmars T et al. Viable metacercariae of Opisthorchis viverrini in northeastern Thai cyprinid fish dishes-as part of a rational program for control of O. viverrini-associated cholangiocarcinoma. Parasitology Research, 2012, 112: 1323-1327.
[6] Boueroy P, Duenngai K, Eamudomkarn C et al. Effect of Temperature on the Killing of Opisthorchis viverrini Eggs In Vitro. The Korean Journal of Parasitology, 2019, 57: 49-53.
[7] Prasopdee S, Kulsantiwong J, Sathavornmanee T et al.The effects of temperature and salinity on the longevity of Opisthorchis viverrini cercariae: a climate change concern. Journal of Helminthology, 2020, 94e165.
[8] Parichart B, Kunyarat D, Chatanun E et al. Effect of Temperature on the Killing of Opisthorchis viverrini Eggs In Vitro. The Korean Journal of Parasitology, 2019, Vol.57: 49-53.
[9] Onsurathum S, Pinlaor P, Haonon O et al. Effects of fermentation time and low temperature during the production process of Thai pickled fish (pla-som) on the viability and infectivity of Opisthorchis viverrini metacercariae. International Journal of Food Microbiology. 2016, 218: 52-57.
[10] Sripa B, Kaewkes S, Sithithaworn P et al. Liver Fluke Induces Cholangiocarcinoma. PLoS Medicine, 2007, 4: e201.
[11] Liau M Y Q, Toh E Q, Shelat VG. Opisthorchis viverrini-Current Understanding of the Neglected Hepatobiliary Parasite. Pathogens, 2023, 12: 795.
[12] Boonsuya A, Arunsan P, Pechdee P et al. Detection of the carcinogenic liver fluke, Opisthorchis viverrini: comparison of two coprological methods versus the automatic feces analyzer. Tropical biomedicine, 2024, 41: 264-270.
[13] Pumpa S, Phadungsil W, Grams R et al. Improvement of a PCR-based method for the detection of Opisthorchis viverrini eggs in human stool samples by targeting internal transcribed spacer-2 (ITS-2), cytochrome oxidase subunit 1 (cox1), and cytochrome b (cyb). Journal of Parasitic Diseases, 2021, 45: 474–478.
[14] Kiatsopit N, Andrews RH, Tesana S et al. Exceptionally High Prevalence of Infection of Bithynia siamensis goniomphalos with Opisthorchis viverrini Cercariae in Different Wetlands in Thailand and Lao PDR. The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene, 2012, 86: 464-469.