立克次体（Rickettsia）
物种名：立克次体
拉丁学名：Rickettsia
分类学地位：细菌界Bacteria；假单胞菌门Pseudomonadota；
α-变形菌纲Alphaproteobacteria；立克次体目Rickettsiales；
立克次体科Rickettsiaceae；立克次体属Rickettsia
立克次体（Rickettsia）为革兰氏阴性菌，是一类以节肢动物为传播媒介、严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。其共同特点包括：含有DNA和RNA；多为球杆状，有细胞壁，革兰染色阴性；专性细胞内寄生，以二分裂方式繁殖；与节肢动物关系密切，吸血节肢动物为其储存宿主或传播媒介。对人类有致病作用的主要包括立克次体属、东方体属、无形体属、埃立克体属和新立克次体属，可引起流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、斑点热、恙虫病等疾病[1]。
1.1生物学特性
1.1.1培养特征
立克次体为专性细胞内寄生，以二分裂方式繁殖，繁殖一代需9-12小时。立克次体具有相对较完整的能量产生系统，能氧化三羧酸循环中的部分代谢产物，有较独立的呼吸与合成能力，但仍需从宿主细胞中获得辅酶A、NAD及代谢中所需的能量才能生长繁殖。常用的培养方法有细胞培养、鸡胚卵黄囊接种和动物接种。多种病原性立克次体在小鼠和豚鼠体内繁殖良好。目前采用鸡胚成纤维细胞、1929细胞和Vero单层细胞进行分离、鉴定、传代和培养，最适温度为37℃[2]。
图1 感染立克次体的Vero细胞的电镜照片[3]
注：箭头所指为在自噬样空泡中正在退化的立克次体。图的标尺为1 μm
1.1.2形态学特征
立克次体呈多形性，球杆状或杆状多见，在不同发育阶段不同宿主内可出现不同形态，如长杆状、丝状或哑铃状，大小为0.3-0.6 μm×0.8-2.0 μm。在感染细胞内，立克次体常聚集成致密团块状，但也可成单或成双排列。不同立克次体在细胞内位置有差异，此特点可供初步识别。如普氏立克次体在胞质内分散存在；恙虫病东方体多在胞质近核处成堆排列；立氏立克次体可在胞质内和核内生长。革兰染色阴性，但着色不明显，因此常用Giemsa法染色，立克次体被染成蓝色或紫色，常有两极浓染；也可用Gimenez法或Macchiavello法，前者立克次体被染成红色，后者染成紫红色[1]（图2）。
图2 立克次体的Gimenez染色卵黄囊涂片的显微照片[4]
1.1.3生化特征
立克次体抵抗力均较弱，可被56℃、0.5%苯酚和75%酒精数分钟灭活。在节肢动物粪便中可存活1年以上。离开宿主迅速死亡，但在-20℃或冷冻条件下可保存数年。对四环素、利福平、强力霉素等抗生素敏感，但磺胺类药物则可促进其生长繁殖[5]。
1.2分布、传播与致病性
1.2.1分布与传播
立克次体病是一类人兽共患的自然疫源性疾病。人体通过感染立克次体的昆虫叮咬或接触其粪便而感染，多发生于热带与亚热带国家和地区。
斑疹伤寒群立克次体如普氏立克次体，通过人类体虱进行传播，体虱叮咬人类皮肤形成伤口，并通过粪便感染这些伤口，从而引起流行性斑疹伤寒。斑点热群立克次体如立氏立克次体，其主要通过蜱类传播，受环境湿度和温度、自然植被与野生动物、人类活动及杀虫剂应用等因素的影响，呈现地域流行性特征。恙虫病由恙虫病东方体引起，通过恙螨幼虫传播，主要分布于丛林地区，也称丛林斑疹伤寒[6]。
1.2.2致病性
立克次体可导致人的流行性斑疹伤寒（普氏立克次体）、洛矶山斑点热（立氏立克次体）、鼠/地方性斑疹伤寒（斑疹伤寒立克次体）、恙虫病（恙虫东方体）等。
立克次体侵入人体后，先在局部淋巴组织或小血管内皮细胞中繁殖，引起初次菌血症。再经血液扩散至全身器官的小血管内皮细胞中繁殖后，大量立克次体释放人血导致第二次菌血症。由立克次体崩解释放的内毒素等毒性物质也随血液流向全身，引起毒血症。立克次体损伤血管内皮细胞，引起细胞肿胀和组织坏死，血管通透性增强，导致血浆渗出、血容量降低以及凝血机制障碍、DIC（弥散性血管内凝血）等。常伴有全身实质性脏器的血管周围广泛性病变，皮肤可出现皮疹，肝、脾、肾等则出现相应脏器损害症状。晚期机体内由于抗原抗体复合物的形成，可加重临床症状，甚至可因心、肾衰竭而死亡[5]。
1.3检测方法
（1）传统方法：分离细胞培养检测、药物敏感试验以及采集患者血液或病体的生物标本进行检测[7]。
（2）免疫学方法：免疫学直接检测，通过皮肤活检标本的冷冻切片或甲醛固定、石蜡包埋、切片，使用荧光标记的抗立克次体单克隆或多克隆抗体，DFA法染色切片；或使用血清学检测，IFA为血清学金标准，其他血清学方法有胶乳凝集法、EIA免疫印迹法[7]。
（3）分子生物学法：PCR法、荧光PCR法、巢式PCR法等。如使用多重荧光PCR检测。结果判定：扩增曲线呈S型且Ct值≤38阳性，Ct值≥41阴性，38<Ct值<40应重复检测[8]。
表1 多重荧光PCR检测引物及探针[8]
| 病原体 | 荧光基团-序列-淬灭基团（5’→3’） | 扩增大小 |
| 恙虫东方体 | CAGAAGGTATCTACAGTGCAGCC GCTTCTCCGTCTACATCATCAG
FAM-TGTGCTTGAAGCTGTTGCTCACACTG-BHQ1 |
101 bp |
| 莫氏立克次体 | TGTTCTGCGATGTTATAGAAAGGT GAAACTGCTGATGTTGGTGGAT
ROX-TGATCAATCGCTTCATCACCTGAAGA-BHQ2 |
113 bp |
| 斑点热群立克次体 | ATATTGCTCAAAATACCGTTGTTG
AAGTTAAGCTTTTGCCGACAGT VIC-ACGGGAGGTAACTTGTTGCCTGTTAC-BHQ1 |
87 bp |
1.4典型案例
2014年巴西里约热内卢州爆发了巴西斑疹热，最初发现在犬的身上，而后感染了该地区的人类并引起了死亡。在通过观察感染的犬血清确定动物感染的可能病原体，发现是由立克次体所引起的斑疹热。该地区拥有独特的水文环境，卡兰戈拉河流经整个城市，甚至与城市的商业中心接壤，同时该地区的温度也很适合立克次体的存在，因此动物与易感染环境的持续接触，导致了斑疹热的爆发[9]。
1.5防治对策
防治立克次体病应注意消灭传播媒介，灭虱、灭蚤、灭蜱、灭螨等，搞好环境卫生，外出旅游，尤其是深入丛林、草原等自然疫源地，需注意个人防护，避免和宠物密切接触。特异性预防主要是接种疫苗。治疗可用氯霉素、四环素和多西环素类抗生素，严禁使用磺胺类药物[5]。
参考文献
[1] 王桂琴, 陈云霞. 医学微生物学. 北京: 中国医药科技出版社, 2023.
[2] 汪晓静, 谷存国. 病原生物与免疫. 北京: 中国科技医药出版社, 2022.
[3] Uchiyama T. Tropism and pathogenicity of rickettsiae. Frontiers in Microbiology, 2012, 3: 230.
[4] Public Health Image Library (PHIL). https://phil.cdc.gov/Details.aspx?pid=10953.
[5] 杨文, 沈萍, 欧阳艳. 动物微生物与免疫技术. 武汉: 华中科技大学出版社, 2022.
[6] 张骁鹏, 李炘檑, 郑波 等. 立克次体与立克次体病的检测与鉴定. 微生物与感染, 2015, 10: 194-198.
[7] 朱书照. 现代医学检验与新技术. 上海: 上海科学普及出版社, 2023.
[8] 亚红祥, 董珊珊, 杨智明 等. 立克次体多重荧光PCR检测方法的建立及初步应用. 海峡预防医学杂志, 2024, 30: 61-64.
[9] Poubel IT, Cunha NC, Fonseca ABM et al. Seroprevalence of Rickettsia rickettsii and Rickettsia parkeri in dogs during a Brazilian Spotted Fever outbreak in the State of Rio de Janeiro. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, 2018, 70: 667-674.