**胞内分枝杆菌（Mycobacterium intracellulare）**

物种名：胞内分枝杆菌

拉丁学名：Mycobacterium intracellulare

分类学地位：细菌界Bacteria；放线菌门Actinomycetota；

放线菌纲Actinomycetia；分枝杆菌目Mycobacteriales；

分枝杆菌科Mycobacteriaceae；分枝杆菌属Mycobacterium

胞内分枝杆菌（Mycobacterium intracellulare）是非结核分枝杆菌中常见的一种分离株，广泛存在于水、土壤和灰尘等自然环境中，可通过接触传染源、创伤和手术等途径被感染，常有发热、盗汗、体重减轻、脑病、腹痛、腹泻和贫血等症状。

1.1生物学特性

1.1.1培养特征

胞内分枝杆菌在蛋培养基上稀释接种，37℃培养7天或更长的时间，菌落光滑无色，老菌落可能变为黄色；在油酸卵蛋白琼脂上，菌落光滑、较薄、透明、无色，中心时常变厚，很少有粗糙菌落。

1.1.2形态学特征

胞内分枝杆菌呈短或长杆状，刚开始生长时为丝状，经过一定时间后会变成球杆状，整体呈现细长略弯曲，无鞭毛、无芽胞、不产生内、外毒素。该菌细胞壁含有大量脂质，对其进行抗酸染色呈阳性，本菌被染成红色^[1]。

图1 胞内分枝杆菌抗酸染色图片^[2]

1.1.3生化特征

胞内分枝杆菌通常不产生色素，在40-42℃下生长慢。该菌具有一定的致病性，在100℃下煮沸能耐受10分钟仍不失去抗酸性。鉴定该菌与结核分枝杆菌，可将可将菌苔置于含盐水小滴的玻片上研磨，非结核分枝杆菌不易乳化而结核分枝杆菌容易乳化^[1]。

1.2分布、传播与致病性

1.2.1分布与传播

胞内分枝杆菌广泛存在于水、土壤和灰尘等自然环境中，感染的鸟类、哺乳动物和富含鸟粪的土壤可能是该菌的自然宿主。该菌常通过粪-口途径进行传播，免疫力低下人群更容易感染该菌^[3]。

1.2.2致病性

胞内分枝杆菌常与鸟分枝杆菌结合形成鸟-胞内分枝杆菌复合体，复合体的致病性比其他的非结核分枝杆菌更强。感染该菌主要表现为慢性肺部感染，儿童表现为淋巴结炎，免疫抑制患者（尤其是AIDS）呈播散性感染。常伴随发热、盗汗、体重减轻、脑病、腹痛、腹泻和贫血等症状。除此之外，还会对皮肤造成伤害，表现为脓肿或溃疡。

胞内分枝杆菌通常通过呼吸道或肠道途径感染，能够侵入粘膜上皮细胞，并在肠道和呼吸道粘膜上易位。通过表面黏附素（如：肝素结合血凝素）与宿主细胞受体结合，诱导巨噬细胞吞噬。在宿主免疫力下降时，胞内分枝杆菌可突破肉芽肿屏障，导致播散性感染^[3]。

1.3检测方法

传统方法：采用齐-尼抗酸染色法对胞内分枝杆菌进行染色鉴定。使用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5 min，待标本冷却后用水冲洗；3%盐酸酒精脱色30 s-60 s；用水冲洗；用碱性美兰溶液复染1 min，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察^[1]。但抗酸染色法无法区分胞内分枝杆菌和其他分枝杆菌（如：结核分枝杆菌）。
分子生物学检测方法：Pfaller^[4]等建立了基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR技术检测胞内分枝杆菌的方法。以胞内分枝杆菌16S rRNA 基因的特异序列为检测靶标，设计特异性引物和探针。该方法采用同一上游引物和探针，但通过特异性反向引物区分鸟分枝杆菌与胞内分枝杆菌。该方法特异性和灵敏度高。具体引物序列见表1。

表1 胞内分枝杆菌qPCR引物和探针序列

名称	序列
F	5′-GGGTGGATTAACACGTGTGCAA-3′
R	5′-CCACCTAAAGACATGCGACTAAA-3′
探针	5′-FAM-TGCACTTCGGGATAAGCCTGGGAAA-TAMRA-3′

（3）免疫学检测方法：使用自主制备的抗HBHA蛋白单克隆抗体包被酶标板，经1% BSA封闭后，依次加入待测样本、1:400稀释的抗鼠血清（作为检测抗体）及HRP标记的二抗，最后通过TMB显色并在450nm波长下测定OD值，以P/N值（样品OD值/阴性对照OD值）≥2.1判为阳性。该方法经优化和验证，对浅黄分枝杆菌等其他分枝杆菌无交叉反应，灵敏度可达200个菌体/ml，对60份临床样品的检测准确率为93.3%^[5]。

1.4典型案例

Pfaller^[4]等收集了美国不同地区的水龙头水样，总共292个饮用水样品，主要是厨房水槽、浴室水槽、饮水机、水厂处理水和各类地表水、地下水等。通过培养和qPCR分析，在35%（102/292）的样品中检测到胞内分枝杆菌的存在，东北部站点的细胞内分枝杆菌的样本阳性率最高。

1.5防治对策

免疫低下者（如艾滋病患者）可口服克拉霉素或阿奇霉素预防，避免接触污染水源；医院环境需要定期消毒，减少医院水源及器械的胞内分枝杆菌定植风险。治疗可采用联合用药，例如克拉霉素、乙胺丁醇、利福霉素等。

参考文献

[1] 胡桂, 刘成侠. 病原微生物学与免疫学实验技术. 北京: 中国医药科技出版社, 2015.

[2] Public Health Image Library (PHIL). https://phil.cdc.gov/Details.aspx?pid=965.

[3] Suresh A, Kamath GS, Latheef F et al. Diagnosis of Mycobacterium. Springe, 2023.

[4] Pfaller S, King D, Mistry JH et al. Occurrence revisited: Mycobacterium avium and Mycobacterium intracellulare in potable water in the USA. Applied Microbiology and Biotechnology, 2022, 106: 2715-2727.

[5] 王康, 葛淑敏, 宋力强等. 胞内分枝杆菌ELISA检测方法的建立及初步应用. 现代预防医学, 2019, 46: 1668-1671+1683.