环孢子虫（Cyclospora）
物种名：环孢子虫
拉丁学名：Cyclospora
分类学地位：真核生物界Eukaryota；顶复门Apicomplexa；锥顶纲Conoidasida；真球虫目Eucoccidiorida； 艾美耳科Eimeriidae；
环孢子虫属Cyclospora
环孢子虫是一种单细胞的球虫类寄生虫，是导致人类环孢子虫病（Cyclosporiasis）的唯一确认病原体。该病是一种新兴的食源性和水源性肠道疾病，以引起长时间、复发性水样腹泻为特征。该寄生虫在全球范围内暴发，特别是与食用被污染的新鲜农产品（如浆果、生菜、香草等）相关，已成为一个重要的公共卫生问题。
1.1生物学特性
1.1.1生活史
环孢子虫的生活史是一个复杂且精细的过程。它始于宿主摄入含有感染性卵囊的食物或水，这些卵囊在宿主肠道内释放子孢子，进而侵入肠上皮细胞[1]。在细胞内，子孢子进行裂殖生殖，产生大量的裂殖子[2]。随后，裂殖子发育为雌、雄配子，通过配子结合形成合子。合子进一步发育成新的卵囊，这些卵囊在宿主细胞内形成，并最终随粪便排出体外，排出的卵囊需在外界环境完成孢子化成熟后才可感染新宿主，从而完成一个生活史循环。在此过程中，环孢子虫巧妙地利用了宿主细胞的资源，完成了其生命周期的繁衍。对其生活史的研究不仅有助于深入了解这一寄生虫的生物学特性，也为预防和控制相关疾病提供了重要的理论依据。
图1 环孢子虫生活史与特征[1]
A：环孢子虫的生活史，B：环孢子虫的镜检图，C：环孢子虫的显微形态
1.1.2形态学特征
环孢子虫卵囊呈圆形或椭圆形，直径4-6 μm，成熟卵囊内含4个裸露的子孢子和残留体（residual body）[1]。子孢子呈月牙形，残留体由颗粒状物和一空泡组成[3]。在改良抗酸染色标本中，卵囊为玫瑰红色，背景为蓝绿色，对比性很强，囊内子孢子排列不规则，形态多样，残留体为暗黑（棕）色颗粒状。
图2 环孢子虫的形态结构[1]
1.2分布、传播与致病性
1.2.1分布与传播
环孢子虫病呈全球性分布，在热带和亚热带地区更为流行。在非流行区（如美国、加拿大），该病通常以与进口新鲜农产品相关的季节性暴发形式出现。由于卵囊需要在外界环境中孢子化，因此人与人之间几乎不存在直接传播。环孢子虫病是新发的食源性和水源性肠道原虫病，被环孢子虫感染性卵囊污染的食物或水是重要传染源[4]。
1.2.2致病性
环孢子虫病的潜伏期约为1周。典型症状包括暴发性水样腹泻（每日可达6-7次）、食欲不振、显著体重减轻、腹胀、恶心和严重疲劳。症状可持续数周至数月，并常呈复发-缓解交替的模式。感染剂量较低，估计摄入10-100个卵囊即可致病[1]。
美国CDC（美国疾病控制与预防中心）和NIH（美国国立卫生研究院）将卡耶塔环孢子虫（Cyclospora cayetanensis）列为生物安全二级（BSL-2）病原体[5]。目前全球的常规饮用水和地表水标准中，均未对环孢子虫设定法定限值。美国环保署（EPA）在其《污染物候选清单》中已将C. cayetanensis列入，表明对其在饮用水中的风险正在进行评估。
1.3检测方法
（1）显微镜检查法：这是传统的诊断方法，尤其适用于资源有限的地区。其分为湿片镜检法和改良抗酸染色法。湿片镜检法（结合荧光）：将粪便浓缩后的沉淀物制成湿片，在紫外荧光显微镜下观察。环孢子虫卵囊会发出明亮的蓝色或绿色自发荧光，非常易于识别。这是目前最高效的显微镜筛选方法。改良抗酸染色法：将粪便涂片后进行染色，环孢子虫卵囊的囊壁能抵抗酸性酒精的脱色而呈现粉红色至红色，背景为蓝色或绿色[6]。
（2）实时荧光PCR法（Real-time PCR）：该方法是目前最敏感、最特异的检测方法，广泛用于临床诊断和食品、水样的检测。操作原理：提取样本（粪便、食品洗液等）中的总DNA，使用特异性引物和探针扩增环孢子虫的靶基因（通常为cox基因）[7]。通过监测荧光信号的实时变化来判断是否存在环孢子虫DNA。其引物和探针示例（源自美国FDA《细菌学分析手册》）如表1。美国食品药品监督管理局（FDA）的《细菌学分析手册》（Bacteriological Analytical Manual, BAM）第19b章详细规定了检测食品和水中环孢子虫的PCR方法。
表1 环孢子虫实时荧光PCR法常用引物序列
| 名称 | 序列 |
| 正向（CYO-F3E） | 5′-CGTGTTYGGTATTAATGCAGAAC-3′ |
| 反向（CYO-R2B） | 5′-GNAACATACCTACGAAACACCAG-3′ |
| 探针（CYO-P1B） | 5′-FAM-CGCGCCTGCTGCCTTCCTTAGATG-BHQ1-3′ |
1.4典型案例
1996年春季，美国和加拿大暴发了一起大规模环孢子虫病疫情，报告病例超过1400例。流行病学调查迅速将疫情与食用来自危地马拉的新鲜覆盆子联系起来。此次事件是首次确认环孢子虫可通过进口新鲜浆果进行大规模传播，对食品安全领域产生了深远影响。作为应对，美国FDA发布了针对危地马拉覆盆子的进口警示，并推动了国际上针对新鲜农产品的良好农业规范（GAP）的实施[8]。
2018年夏季，美国中西部多个州暴发了环孢子虫病疫情，最终确认超过500名患者。调查发现，大部分患者曾在麦当劳餐厅食用过沙拉。美国FDA和CDC通过溯源调查，将污染源头锁定为Fresh Express公司位于伊利诺伊州的一家加工厂生产的生菜沙拉混合物。此次事件导致麦当劳在3000家餐厅紧急停售沙拉，并销毁了相关产品，凸显了在复杂的现代食品供应链中，病原体污染的快速扩散风险[9]。
1.5防治对策
（1）保持良好的个人卫生习惯，如勤洗手、饮用清洁水源和避免食用可能被污染的食物。
（2）对于已经感染的患者，治疗措施主要包括补液、纠正电解质紊乱和抗生素治疗。
（3）加强公共卫生设施和食品安全监管。
参考文献
[1] Ortega YR, Sterling CR, Gilman RH et al. Cyclospora species-a new protozoan pathogen of humans. New England Journal of Medicine, 1993, 328: 1308-1312.
[2] Eberhard ML, Ortega YR, Hanes DE et al. Attempts to establish experimental Cyclospora cayetanensis infection in laboratory animals. Journal of Parasitology, 2000, 86: 577-582.
[3] Ooi WW, Zimmerman SK, Needham CA. Cyclospora species as a gastrointestinal pathogen in immunocompetent hosts. Journal of Clinical Microbiology, 1995, 33: 1267-1269.
[4] 裴赵萍. 反刍动物肠道原虫种类及防控措施. 北方牧业, 2022: 000.
[5] Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). 6th ed. Washington, DC: U.S. Department of Health and Human Services, 2020.
[6] Garcia LS. Diagnostic Medical Parasitology. 6th ed. 2016.
[7] United States Food and Drug Administration. Molecular detection of Cyclospora cayetanensis in fresh produce using real-time PCR(BAM Chapter 19b). 2020.
[8] Herwaldt B. Cyclospora cayetanensis: A review, focusing on the outbreaks of cyclosporiasis in the 1990s. Clinical Infectious Diseases, 2000, 31: 10.
[9] Casillas SM, Bennett C, Straily A. Notes from the field: multiple cyclosporiasis outbreaks – United States, 2018. Morbidity and Mortality Weekly Report, 2018, 67: 1101-1102.