狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）

物种名：狂犬病病毒

拉丁学名：Rabies lyssavirus

分类学地位：病毒界Riboviria；负核糖病毒门Negarnaviricota

单股反链病毒纲Monjiviricetes；单股负链目Mononegavirales；

弹状病毒科Rhabdoviridae；狂犬病毒属Lyssavirus

狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）引起的人兽共患病，病毒主要通过被感染的动物咬挠伤进行传播，侵入宿主的中枢神经系统后造成不可逆损伤。狂犬病一旦发生，致死率可达100%^[1]。

1.1生物学特性

1.1.1培养特征

狂犬病病毒可在鼠源神经母细胞瘤（NA）细胞、Vero细胞或BHK-21细胞中复制，最适培养温度34-37℃。感染后24-48 h出现典型细胞病变效应（CPE）：细胞变圆、拉丝、脱落；用荧光抗体染色可在胞浆内观察到苹果绿色颗粒状荧光^[2]。经典小鼠颅内接种法亦可分离病毒，3-7 d小鼠出现震颤、麻痹、死亡^[3]。

图1 狂犬病毒颗粒^[4]

1.1.2形态学特征

病毒粒子呈子弹状，长约130-300 nm，直径约75 nm（图1）；外被脂质包膜，表面密布糖蛋白G刺突（图2）；核衣壳内含单股负链RNA（约12 kb），与核蛋白N紧密缠绕形成螺旋对称结构^[3]。电镜下可见一端平截、一端圆滑，形态特征明显。

图2 狂犬病毒形态特征^[5]

1.1.3生化特征

狂犬病病毒缺乏完整酶系统，依赖宿主细胞完成RNA转录与复制；病毒粒子内含依赖RNA的RNA聚合酶（L蛋白）。病毒对乙醚、氯仿、β-丙内酯敏感，pH＜3迅速灭活，56℃ 1 h完全失去感染力^[4]。

1.1.4分子生物学特征

病毒基因组为单股负链RNA，全长约11932 nt，编码5个结构基因：N（核蛋白）、P（磷蛋白）、M（基质蛋白）、G（糖蛋白）和L（RNA聚合酶）。G基因序列常用于毒株分型和系统进化分析；N基因高保守区是实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）诊断靶标^[5]。

1.2分布、传播与致病性

1.2.1分布与传播

狂犬病病毒呈全球性分布（除南极洲及少数无疫岛屿外）。储存宿主包括犬、猫、蝙蝠、狐狸、浣熊、臭鼬等，其中犬科动物是发展中国家的主要传染源。病毒大量存在于感染动物的唾液中，通过咬伤、抓伤或黏膜接触传播给人类。病毒沿外周神经向中枢神经系统迁移，潜伏期通常20-90 d，短者仅数天，长者可达数年^[6]。

1.2.2致病性

病毒首先在外周神经肌肉接头处与乙酰胆碱受体结合，经轴浆逆行至脊髓和大脑，引起急性脑脊髓炎。临床经过分前驱期、兴奋期、麻痹期，典型症状包括恐水、怕风、痉挛、意识障碍，最终因呼吸循环衰竭死亡。一旦出现临床症状，病死率接近100%。暴露后及时彻底清洗伤口并联合狂犬病疫苗与被动免疫制剂（RIG）可有效阻断发病^[7]。

1.3检测方法

直接荧光抗体法（DFA）^[8]：适用范围包括动物或人死后脑组织（脑干+小脑）现场快速确诊；灵敏度与特异度均＞99%，被WHO、OIE、中国疾控中心列为“金标准”。

操作原理：用FITC标记的抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体与脑组织印片孵育；荧光显微镜下可见胞浆苹果绿色颗粒即为阳性。检测时间：2-4 h可出结果。

分子检测（RT-qPCR）：
实时荧光定量反转录PCR（RT-qPCR）是近年来用于狂犬病病毒检测的重要分子诊断方法，可直接检测病毒RNA，具有较高的灵敏度和特异性。该方法通常选择病毒核蛋白（N）基因的保守区域作为扩增靶标，并设计特异性引物和TaqMan探针，以保证检测的准确性和广谱性^[9]。

RT-qPCR检测的一般步骤包括：①样本采集（如脑组织、唾液或皮肤活检标本）；②病毒RNA提取；③逆转录反应生成cDNA；④配置PCR反应体系（包括特异性引物、探针、酶及缓冲液）；⑤进行实时荧光扩增并记录Ct值；⑥结果分析与病毒载量评估^[10]。

该方法检测灵敏度较高，部分研究显示最低检测限可达5–50 copies反应体系，或约10³ copies/mL水平^[11]。此外，通用引物体系可实现对不同狂犬病病毒及相关Lyssavirus的广谱检测，提高了流行病学监测能力。

1.4典型案例

2021年，秘鲁亚马逊部落群体感染^[12]。危害：至少7人感染死亡（均为原住民儿童），蝙蝠叮咬传播。病原体是否超标：当地吸血蝙蝠种群狂犬病毒携带率超常达10%（正常＜1%），引发社区暴发。处置结果：紧急为2000名居民接种人用狂犬疫苗；政府扑杀高感染率蝙蝠群落，加强动物监测。

1.5防治对策

（1）加强犬只管理：普及犬只登记、疫苗年免，流浪犬捕捉-绝育-放归或人道处置。

（2）暴露后处置：立即用肥皂水和流动水交替冲洗伤口至少15 min，再用碘伏消毒；全程接种狂犬病疫苗，Ⅲ级暴露需加用狂犬病被动免疫制剂（RIG）。

（3）监测与预警：建立动物狂犬病哨点监测，发现异常死亡及时采样送检，实现“早检测、早预警、早处置”。

参考文献

[1] 赵韩, 莫若, 王琼等. 狂犬病病毒 VHH 抗体库的构建、表达及鉴定. 中国病原生物学杂志, 2025, 20: 836-840.

[2] World Health Organization. Laboratory Techniques in Rabies. 5th ed. Geneva: WHO, 2018.

[3] Centers for Disease Control and Prevention. Rabies Laboratory Manual. Atlanta: CDC, 2020.

[4] Public Health Image Library (PHIL). https://wwwn.cdc.gov/phil/Details.aspx?pid=23614

[5Public Health Image Library (PHIL). https://wwwn.cdc.gov/phil/Details.aspx?pid=1876

[4] World Organization for Animal Health. https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals/terrestrial-manual-online-access/

[5] Rupprecht CE, Fooks AR, Abela-Ridder B. Laboratory Techniques in Rabies. 5th ed. Geneva: World Health Organization, 2018.

[6] World Health Organization. Rabies vaccines: WHO position paper-April 2018. Weekly Epidemiological Record. 2018, 16: 201-20

[7] Centers for Disease Control and Prevention. Expert Consensus on Clinical Management of Human Rabies. China CDC Weekly, 2021, 3: 715-720.

[8] 国家卫生健康委员会. 狂犬病预防控制技术指南 (WS 281-2008). 2017.

[9] Black EM, McElhinney LM, Lowings JP et al. Molecular methods to distinguish between classical rabies and the rabies-related European bat lyssaviruses. Journal of Virological Methods. 2000, 87: 123-131.

Kamolvarin N, Tirawatnpong T, Rattanasiwamoke R et al.Diagnosis of rabies by polymerase chain reaction with nested primers. The Journal of Infectious Diseases. 1993, 167: 207-210.

[11] Dedkov VG, Deviatkin AA, Poleshchuk EM et al. Development and evaluation of a RT-qPCR assay for fast and sensitive rabies diagnosis. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 2018, 90: 18-25.

[12] PLOS Neglected Tropical Diseases. https://journals.plos.org/plosntds.