细小病毒(Parvoviruses)

物种名:细小病毒

拉丁学名:Parvoviruses

分类学地位:单链DNA病毒界Monodnaviria;科萨病毒门Cossaviricota;

昆托病毒纲Quintoviricetes;细小病毒目Piccovirales;

细小病毒科Parvoviridae;细小病毒属Parvovirus

细小病毒(Parvovirus)属于细小病毒科,病毒颗粒无囊膜,基因组为单链线状DNA。细小病毒的自然感染宿主范围较广,包括脊椎动物、无脊椎动物及人类。由细小病毒引起的细小病毒病正在全球范围内流行,并严重威胁着人与动物的健康[1]。

1.1生物学特性

1.1.1培养特征

细小病毒基因组为单链DNA,长4.5-5.0kb,是结构最简单的DNA病毒之一。这类病毒复制能力存在缺陷,其本身不带有聚合酶、也不编码此类酶,必须利用宿主细胞的DNA聚合酶来合成病毒DNA。正因如此,细小病毒的DNA复制在很大程度上依赖于宿主细胞的复制系统。当体外进行该病毒培养传代时,不能像一般常规实验那样等到细胞长成单层后才接毒,而必须在细胞培养的同时或最迟在24 h内接种病毒,才能达到使病毒良好增殖的目的。有研究显示,接毒时机对病毒增殖有显著影响,如12 h接毒时病毒滴度可达最高[2]。

1.1.2形态学特征

细小病毒属于细小病毒科,病毒粒子呈二十面体对称,直径约为20-25 nm。病毒粒子具有一个外壳,由多种蛋白组成,保护内部的遗传物质。在电子显微镜下,细小病毒的形态清晰可见,呈现出典型的病毒粒子结构。

细小病毒样粒子形态

图1 分离到的CPV电镜形态学观察[3]

1.1.3生化特征

细小病毒的遗传物质为单链DNA,基因组较小,核心含单股线状负链DNA。病毒粒子无囊膜,对脂溶剂及有机溶剂具有很强的抵抗力,但0.5%漂白粉或氢氧化钠5 min即可将其杀死,甲醛蒸汽和紫外线则需要相当长的时间才能将其杀死。该病毒虽具有较强的耐热能力,但高温条件下仍可使其失去活性[4]。

1.2分布、传播与致病性

1.2.1分布与传播

细小病毒广泛分布于自然界中,能够感染多种哺乳动物和鸟类。病毒通过直接接触、飞沫或粪口途径等方式传播。在人群中,细小病毒感染通常呈现散发或小规模流行的特点。

猪细小病毒的天然宿主只有猪,对猪的感染不分品种、性别、年龄,不同品种、年龄、性别的生猪均能被感染。除初次妊娠的母猪外,其它猪感染临床无明显症状。该病的传播途径主要包括水平传播和垂直传播:水平传播如经口鼻途径的呼吸道、消化道感染;垂直传播如种公猪精液带毒通过交配或人工授精感染母猪、妊娠母猪经胎盘垂直传播给胎儿。猪细小病毒病一年四季均可发病、无明显季节性。该病的主要传染源为感染病毒的母猪和种公猪。由于病毒对外界环境适应力较强、对一般消毒剂具有一定耐受性,在环境中可存活较长时间[5]。

1.2.2致病性

细小病毒感染可引起多种疾病,如犬细小病毒病、猪细小病毒病等。猪细小病毒病的致病性与感染所处的妊娠阶段密切相关。在怀孕早期30-50日龄感染,胚胎死亡或被吸收,母猪可出现不孕和不规则反复发情;怀孕中期50-60日龄感染,胎儿死亡后形成木乃伊;怀孕后期60-70日龄以上感染,胎儿因具备免疫能力多能存活下来,但可长期带毒。怀孕30-50天感染主要产出木乃伊化胎儿,50~60天感染多出现死产,70天感染出现流产症状,70天后感染多正常产仔但仔猪常带毒。其他猪感染后通常不表现明显临床症状[6]。

1.3检测方法

(1)犬细小病毒可通过胶体金免疫层析法检测,需用到CPV胶体金抗原检测卡。取血液或粪便、分泌物样品与稀释液混合处理后待检。随后用配套滴管吸取3滴-4滴待检样品,缓慢滴加至样品孔中,红色液体在试纸条上移动时放慢加样,整个加样过程控制在1 min内完成。加样完成后将试纸条平放静置10 min,在20 min内判读结果;对照线与检测线均显色时判定为CPV阳性[7]。

(2)分子生物学方法:依据GB/T27533-2024,犬细小病毒分子检测含普通PCR与荧光PCR两种方法。PCR法用特异性引物扩增559 bp片段,经电泳成像判读;荧光PCR采用TaqMan探针法,通过荧光信号实时监测扩增,可定量,灵敏度更高。样品经DNA提取后,按体系配比扩增,设阴阳对照,依据条带或Ct值判定结果,适用于确诊与监测,具体引物与探针序列见表1[8]。

表1犬细小病毒PCR与荧光PCR引物及探针序列[8]

类型 名称 碱基序列(5’→3’)
PCR上游引物(CPVF) CPVF GAATCTGCTACTCAGCCACCAAC
PCR下游引物(CPVR) CPVR GTGCACTATAACCAACCTCAGC
荧光PCR上游引物(PrimerF) PrimerF GACAATCTTGCACCAATGAG
荧光PCR下游引物(PrimerR) PrimerR CCAGATCCTGTAGCTCTTTC
荧光PCR探针(PrimerP) PrimerP (FAM)TGGAGCAGTTCAACCAGACGG(BHQ1)

1.4典型案例

细小病毒与水环境相关的典型案例可见于2023—2024年美国得克萨斯州蒙哥马利县的人细小病毒B19污水监测研究。该研究连续采集当地两座污水处理厂的原污水样本,监测了2024年当地一次细小病毒B19暴发期间污水中的病毒DNA浓度。研究结果显示,污水中B19病毒载量与同期社区临床病例数显著相关,且污水病毒浓度高峰与当地胎儿水肿(hydrops fetalis)病例高峰在时间上基本一致。该研究表明,感染者排出的病毒核酸可进入污水系统,使污水成为反映社区传播水平的重要环境监测介质,可用于细小病毒的流行病学监测[9]。

1.5防治对策

1、加强水源保护:保护水源地免受污染,包括工业废水、农业面源污染和生活污水的排放。定期对水源地进行监测,确保水质安全。

2、完善污水处理系统:建立和完善污水处理设施,确保工业废水和生活污水在排放前经过有效处理,达到排放标准。采用先进的污水处理技术,如生物处理、深度处理等,提高污水处理效率。

3、加强饮用水处理:对饮用水进行严格的净化处理,包括过滤、消毒等步骤,以去除水中的病毒、细菌和其他有害物质。定期对饮用水水质进行检测,确保水质符合卫生标准。

参考文献

[1] 曾倩, 王海军, 裴志花 等. 细小病毒分子生物学检测方法的研究进展. 中国兽医学报, 2019, 39: 183-187.

[2] 吴世妍. 犬细小病毒夹心ELISA及胶体金免疫层析检测法的建立. 南京农业大学, 2018.

[3] 沈海潇, 李鑫, 杨德全 等. 上海地区犬细小病毒病流行情况调查与病毒的分离鉴定. 畜牧与兽医, 2020, 52: 127-131.

[4] 刘占通, 王书丽. 猪细小病毒研究进展. 上海畜牧兽医通讯, 2011, 23-25.

[5] 张成刚, 王立红. 猪细小病毒病的临床特点和防治. 养殖与饲料, 2021, 20: 65-66.

[6] 辽宁省市场监督管理局. 猪细小病毒防治技术规范(DB21/T 2008-2025). 2025.

[7] 国家市场监督管理总局,国家标准化管理委员会. 犬细小病毒病诊断技术(GB/T 20033-2025). 2025.

[8] 国家市场监督管理总局, 国家标准化管理委员会. 犬细小病毒病诊断技术 (GB/T 27533-2024). 2024.

[9] Alessandro Zulli, Rebecca Y Linfield, Dorothea Duong et al. Community Infections Linked with Parvovirus B19 Genomic DNA in Wastewater, Texas, USA, 2023-2024. Emerging Infectious Diseases, 2025, 31: 1442-1445.

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