黄热病病毒（Yellow fever virus）
物种名：黄热病病毒
拉丁学名：Yellow fever virus
分类学地位：核糖病毒界Riboviria；黄病毒门Kitrinoviricota；
黄病毒纲Flasuviricetes；黄病毒目Amarillovirales；
黄病毒科Flaviviridae；黄病毒属Orthoflavivirus
黄热病病毒（Yellow fever virus）是黄热病的病原体。黄热病是第一个被发现的人类病毒性疾病，也是第一个被证实以蚊子为媒介进行传播的疾病。临床主要表现为发热、黄疸、出血以及肾衰竭等。目前主要流行于非洲及中南美洲，并在蚊和非人灵长类动物之间存在自然循环传播。我国在2016年之前未发现临床病例，但在2016年安哥拉暴发疫情之后，有11例输入病例。黄热病的预防主要依靠疫苗接种和防蚊措施，疫苗接种对预防感染和控制疫情传播具有重要作用。
1.1生物学特性
1.1.1培养特征
黄热病病毒可在猴肾细胞、兔细胞、鸡胚或鸭胚细胞、猪肾细胞等细胞上进行细胞培养。在细胞培养中，黄热病毒能够引起细胞病变，表现为细胞圆缩、变圆、脱落等现象，此后培养液中会出现大量的细胞碎片和细胞残骸。此外，由于在10 d龄的鸡胚细胞内，黄热病病毒增殖良好，已使用此法制备17D疫苗[1]。
图1 用苏木精-伊红染色从黄热病患者肝组织标本中发现的细胞结构变化[2]
1.1.2形态学特征
黄热病病毒电镜下病毒颗粒呈球形，有包膜，直径大小约为50 nm，分子量为3×106-4×106 kDa，基因组为单股正链RNA，全长为1086个核苷酸。包膜上镶嵌有2种糖蛋白：膜蛋白（M蛋白）和包膜蛋白（E蛋白）。病毒颗粒内部是由基因组RNA和衣壳蛋白（C蛋白）共同组成正二十面体结构的核衣壳[3]。
图2 黄热病病毒颗粒的透射电子显微镜图[4]
1.1.3生化特征
黄热病病毒对外界抵抗力较弱，又极不稳定，不耐热，在常温下容易死亡，常用各类消毒制剂均可灭活其感染性，如2%戊二醛、2%-5%过氧化氢、70%乙醇等。黄热病病毒在血中4℃能存活30 d，在50%甘油中于0℃可保持活力数月；在0℃以下或冷冻干燥条件下可保持活力数年；在-70℃保存10年后，病毒株仍具活力[5]。
1.2分布、传播与致病性
1.2.1分布与传播
黄热病的流行形式因蚊媒以及脊椎动物宿主在病毒传播环节中的作用不同而分为城市型和丛林型。城市型主要通过带毒蚊叮咬易感人群，其唯一传播媒介为埃及伊蚊，以“人-埃及伊蚊-人”的方式传播。丛林型通过带毒蚊叮咬易感人群，其媒介蚊种比较复杂，包括埃及伊蚊、辛普森伊蚊、趋血蚊属等，以“猴-伊蚊或趋血蚊等-猴”的方式循环传播。黄热病病毒主要分布在非洲和中南美洲的热带地区，且在3-4月份时期最频繁暴发；虽然目前为止我国尚未有黄热病流行或确诊病例的报道，但在我国的南方沿海地区有埃及伊蚊存在且气候适宜，极有可能出现黄热病的暴发流行[6]。
1.2.2致病性
黄热病根据病情轻重，可分为极轻型、轻型、重型和恶性型。极轻型和轻型黄热病仅发热、头痛、肌痛持续1-2 d后自愈；重型和恶性型黄热病，可分为病毒血症期、器官损伤期和恢复期。
黄热病的发病机制尚不清楚。当人被感染的蚊虫叮咬后，含黄热病病毒的唾液注入人体皮下毛细血管，病毒迅速扩散到局部淋巴结，不断繁殖。数日后进入血流，形成病毒血症。然后病毒定位于肝、肾、脾、心、骨髓和淋巴结等组织器官，即使血中病毒已经消失，而组织器官中病毒可依然存在。由于病毒的直接损害作用，可引起广泛组织病变，其中肝脏病理变化最具有诊断的特异性。肝脏大小基本正常或轻度肿大，淡黄色。肝小叶中央实质性细胞渐进性坏死，严重时可发生整个肝小叶坏死；坏死细胞呈现玻璃样变和嗜酸性变，胞质中出现小颗粒和核皱缩，形成嗜酸性小体。无明显的炎症反应和纤维组织增生，如有炎症反应，多为并发症所致。在死亡患者肝标本中可分离出黄热病病毒[7]。
1.3检测方法
（1）传统方法：采集发病病例5天内的血清、全血标本或死亡病例的肝组织，对采集的标本进行预处理后，接种至敏感细胞系（如Vero细胞、C6/36蚊细胞）或者进行新生乳鼠颅内接种，将接种后的细胞系及新生乳鼠置于适宜的培养环境中培养并监测。培养结束后，通过观察细胞病变效应（CPE）初步判断病毒，再借助免疫荧光技术或中和试验进行进一步特异性鉴定，最终确认是否为黄热病毒[8]。
（2）酶联免疫吸附试验（ELISA）：已被应用于黄热病病毒的IgM抗体检测。Basile等以山羊抗人IgM抗体包被微孔板（1:2000稀释），捕获血清样本中的IgM抗体，采用黄热病病毒抗原与辣根过氧化物酶标记的黄病毒群反应性单克隆抗体6B6C-1（1:1500稀释）作为检测系统，建立了一种快速MAC-ELISA检测方法。该方法可在约3.5小时内完成检测，灵敏度为84.6%~89.7%，特异度为86.3%~95.7%，总体准确度可达90%以上[9]。
（3）分子生物学方法：Nunes等开发了一种SYBR Green实时荧光定量反转录PCR方法，用于检测黄热病病毒。该方法靶向黄热病病毒E基因的保守区域，通过设计特异性引物实现检测。PCR反应程序为：50℃逆转录20 min，95℃预变性5 min，随后45个循环（95℃变性15 s，55℃退火延伸40 s），反应结束后进行熔解曲线分析（60→90℃，升温速率0.2℃/s）。该方法最低检出量为8.9 PFU/mL，灵敏度为92.3%，特异度为100%，且与登革病毒（DENV 1-4型）、罗西奥病毒（ROCV）、圣路易斯脑炎病毒（SLEV）、布苏奎拉病毒（BSQV）、伊瓜佩病毒（IGUV）等其他黄病毒无交叉反应，特异性良好[10]。
表1 黄热病毒SYBR® Green实时荧光定量RT-PCR检测的引物
| 引物/探针名称 | 序列（5´→3´） |
| YFV 975F | 5′-GATTCCGACATGGCAGTTGAG-3′ |
| YFV 988R | 5′-GCCGGAAGTCACACTCATCC-3′ |
1.4典型案例
一名74岁白人男性，有冠状动脉疾病和高血压病史，既往无已知肝病。因发热、恶心、呕吐和黄疸到急诊科就诊，开始时情况较稳定，但在住院的第2天，他出现了幻视意识模糊；住院第3天，他出现了弥漫性紫癜性皮疹和黑便等症状；同天，心脏骤停，尸检大体检查显示心脏、肝脏和两个肾脏的心外膜和心内膜表面发黄。显微镜分析显示肝细胞次全坏死伴肝细胞坏死、细胞内胆汁淤积和明显的微泡脂肪变性伴中度炎症反应。最终确定是由于他未接受过黄热病病毒疫苗且在访问亚马逊河时感染了黄热病病毒[11]。
1.5防治对策
目前尚无特效药物可以直接针对黄热病病毒进行治疗。治疗主要是对症支持治疗，目的是缓解症状、维持生命体征稳定，并预防和治疗并发症。黄热病病毒最有效的预防方法主要是通过为流行区的居民和旅行者接种疫苗[12]，国境口岸工作人员应时刻保持对黄热病的警惕，防止控制该病输入我国。此外在日常生活中我们要注意防蚊，保持环境卫生清洁，及时清理垃圾和杂物，避免为蚊子提供滋生场所。
参考文献
[1] 环境保护部. 国家污染物环境健康风险名录-生物分册. 北京: 中国环境出版社, 2013.
[2] Public Health Image Library (PHIL). https://phil.cdc.gov/Details.aspx?pid=13018.
[3] 王佑春, 貌盼勇, 舒跃龙. 实用诊断病毒学. 北京: 中华医学电子音像出版社, 2023.
[4] Public Health Image Library (PHIL). https://phil.cdc.gov/Details.aspx?pid=2176.
[5] 武海英, 严冬, 刘增加. 我国黄热病临床流行病学及其防治研究现状. 中华卫生杀虫药械, 2019, 25: 589-593.
[6] 张磊. 生物安全的医学防护-病原微生物学视角. 陕西: 第四军医大学出版社, 2021.
[7] 孙颖浩, 翁铁慧, 陈锦华. 城市核化生爆医学救援指南. 上海: 第二军医大学出版社, 2014.
[8] WHO. Laboratory diagnosis of yellow fever virus infection. WHO, 2018.
[9] Basile J A, Goodman C, Horiuchi K et al. Development and validation of an ELISA kit (YF MAC-HD) to detect IgM to yellow fever virus. Journal of Virological Methods, 2015, 22541-48.
[10] Nunes R M, Palacios G, Nunes N K et al. Evaluation of two molecular methods for the detection of Yellow fever virus genome. Journal of Virological Methods, 2011, 174: 29-34.
[11] Lydia W, Amirahwaty A, Tsujung Y et al. Yellow fever in an unvaccinated traveler to Peru. Open Forum Infectious Diseases, 2017, 4: 205.
[12] Weir E, Haider S. Yellow fever: Readily prevented but difficult to treat. Canadian Medical Association Journal, 2004, 170: 1909-1910.